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免疫组化
发布时间:08月31日 浏览:2966   [ ] 视力保护色:

贵州吉创生物技术有限企业免疫组化实验报告

1 细胞培养:

1)      传心肌细胞至24孔板:将细胞旧培养基抽出,加入2mlPBS2次,加入400μl  0.25% 胶原酶,37℃消化2min

2)      加入完全培养基终止消化,吹打混匀,加入足量培养基,以500μl /孔向24孔板中加入细胞悬液(共传6个孔),37℃继续培养 。

2  实验操作:

1观察:24孔板中细胞生长正常,培养基透明澄清,未见明显微生物活动,覆盖约50%

2 操作:细胞鉴定---TNNI3Assay biotech  B0588 )免疫组化检测

1) 将24孔板旧培养基抽出,用PBS3遍,每次300μl

2) 每孔加入300μl  4%多聚甲醛固定20min

3) 弃掉多聚甲醛,PBS3遍,每次300μl,浸泡3min

4) 使用康为世纪免疫组化染色试剂盒,货号CW2035S。(说明书另附)

5) 试剂一,常温孵育10min

6)去掉试剂一加入PBS 洗三遍,加试剂二, 室温孵育10min 甩干。

7)加入1:100TNNI3抗体(PBS稀释)4℃孵育过夜。

8) 抽掉抗体, PBS3遍,每次3min

9) 加入试剂3 室温孵育10min

10 PBS3遍,每次3min

11) 加入试剂四,室温孵育10min

12 PBS3遍,每次3min

13)配置DAB染色剂,取1ml试剂B1.5ml离心管中,滴加试剂A   2滴,漩涡打匀。

14) 在每孔加入显色剂300μl,显微镜下观察(显红色)。

15)结果如图。

 

1 培养:

1)      传心肌细胞至24孔板:将细胞旧培养基抽出,加入2mlPBS2次,加入400μl  0.25% 胶原酶,37℃消化2min

2)      加入完全培养基终止消化,吹打混匀,加入足量培养基,以500ul/孔向24孔板中加入细胞悬液(共传6个孔),37℃继续培养 。

2 实验操作:

1观察:24孔板中细胞生长正常,培养基透明澄清,未见明显微生物活动,覆盖约50%

2 操作:细胞鉴定---α-Actin(Proteintech  23660-1-AP)免疫组化检测

1) 将24孔板旧培养基抽出,用PBS3遍,每次300ul

2) 每孔加入300μl  4%多聚甲醛固定20min

3) 弃掉多聚甲醛,PBS3遍,每次300μl,浸泡3min

4) 使用康为世纪免疫组化染色试剂盒,货号CW2035S。(说明书另附)

5) 试剂一,常温孵育10min

6)去掉试剂一加入PBS 洗三遍,加试剂二, 室温孵育10min 甩干。

7)加入1:100TNNI3抗体(PBS稀释)4℃孵育过夜。

8) 抽掉抗体, PBS3遍,每次3min

9) 加入试剂3 室温孵育10min

10 PBS3遍,每次3min

11) 加入试剂四,室温孵育10min

12 PBS3遍,每次3min

13)配置DAB染色剂,取1ml试剂B1.5ml离心管中,滴加试剂A   2滴,漩涡打匀。

14) 在每孔加入显色剂300ul,显微镜下观察(显红色)。

15)结果如图。

  

结果该细胞大部分被染成红色,说明该细胞中含有α-Actin抗体。

 

相关标签: 免疫
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